Salón del Palacio de la Santa Rood. Dice que la ciudad tiene disturbios. Alguien desconocido para él a la cabeza de la multitud --mommers, enmascarados, bailarines con campanas, personas con capuchas negras-- amenazó, predijo e instó a la gente a no obedecer a la reina. El cortesano de la reina Riccio confirma que él también observa de vez en cuando la gente escucha con entusiasmo estos sermones. La página además dice que la gente irrumpió en la capilla de la reina gritando: "¡El nido del papista!", Que el bufón de Darnley, el esposo de la reina, saltó al altar y comenzó a fingir ser un sermón, y la gente le respondió con versos burlones. La reina María Estuardo en la desesperación. Siente el odio de la gente, la mayoría de los cortesanos la han abandonado; ella se pregunta cómo su cristianismo puede ser tan diferente del cristianismo de la gente de Escocia. Riccio propone preparar de inmediato un decreto que castigue a los responsables de los disturbios. María dicta su página, la página aclara si se debe ingresar el nombre de Heinrich Darnley, el esposo de la reina. Mary duda; ella sospecha que los disturbios fueron inspirados por él, después de todo, la multitud fue dirigida por el bufón del rey. Aquí Riccio le recuerda que ella es la reina; ella es como el sol y tiene el derecho de castigar a Dios. Exige llamar de inmediato al oficial de turno para anunciar el decreto de la Reina. Douglas entra. María le dice que lleve el papel al canciller real Morton, para que él selle. Douglas escanea el decreto y ve que no tiene el nombre del rey. Le pregunta a la reina sobre esto. Riccio es responsable de ella. Douglas está perdiendo los estribos. Insta a la reina a no usar la represión sangrienta, insinúa que ve esto como influencia francesa o italiana. Pero la reina le recuerda fríamente su poder para eliminar a los sujetos desobedientes a su voluntad. Estalla una pelea entre Riccio y Douglas, Douglas desafía a Riccio a un duelo y jura que matará al veneciano mañana. La reina se va y se lleva a Riccio. Douglas se queda solo, está considerando un duelo. Morton entra. Douglas le muestra el decreto. Morton es indeciso: tiene miedo de la ira tanto del rey como de la reina. Sin sellar, Morton le dice al rey. En este momento, Henry estaba conversando con su bufón Nick, quien se burla de él con el hecho de que la Reina tiene poder real en Escocia, y Henry es solo su esposo, que la Reina elige a los cercanos, por ejemplo, el arpista italiano Riccio ... En este momento, Morton trae un desafortunado decreto. Rey enojado, decide matar a Riccio. El rey Lindsay entra a la corte, llama al rey para cazar con el halcón recién adquirido. Morton responde que el rey ya tiene una ocupación hoy. Lindsay voluntariamente se une al complot contra Riccio. Literalmente prohíbe matar a Riccio esta noche, porque debe matarlo mañana por la mañana. Entonces Henry, aprovechando el retraso, envía el bufón al astrólogo para averiguar cuál es la ubicación de las estrellas para sus intenciones.
El astrólogo en su laboratorio (también es alquimista) argumenta consigo mismo que la experiencia confirma la inutilidad de la ciencia, ese propósito, la voluntad de las estrellas domina al hombre, elimina el bien y el mal. Nick entra, rociado de ingenio, el astrólogo no es inferior a él en ingenio. Nick informa que el rey lo envió a preguntar sobre el destino de Riccio y le dice al astrólogo que prediga la muerte de Riccio. El astrólogo responde que las estrellas le dirán, no a las personas, y a su vez predice la muerte del bufón. Con eso se va. Aparece la página de la reina causada por el astrólogo. Page ama a su amante. El astrólogo le dice que le diga a la reina que hoy el hombre que ama morirá. "¿Cómo, Botwell morirá hoy?" - exclama una página. El astrólogo está perplejo. Tenía en mente a Riccio y está apresurando la página para advertirle sobre esto. Dejado solo, el astrólogo se pregunta, también parecía de las estrellas que Botwell estaba de alguna manera oscuro conectado con la reina, a través de Marte, Saturno ... Botwell entra. Por su monólogo, queda claro que inesperadamente se encontró en la casa de un astrólogo. Al darse cuenta de adónde fue, Botwell le preguntó al astrólogo cuánto necesitaba vivir. El viejo responde que tres años y que Botwell será el rey. El botwell saca una botella de veneno con el que quería suicidarse, quiere tirarlo a la basura y duda. De hecho, en la atmósfera de las intrigas del palacio, cualquier arma será útil. Se va.
La página le dice a la reina que Riccio vendrá pronto. La Reina lo espera con ansias, en su opinión, él solo se mantuvo fiel a ella. "¿Y Botvel?" La página pregunta. "¿Quién es Botvel?" - La reina está interesada. Una página sorprendida le dice a Mary cómo, mientras navegaba, un fuerte viento arrancó una rosa de la cabeza de la reina, una flor cayó al agua. Y luego uno de los cortesanos, Botvel, se precipitó en el bote y persiguió al remero con miedo para recoger una rosa del agua. Después de escuchar la historia, Mary envía una página para orar. Ella le confiesa a Dios que no tiene más fuerzas para resistir su amor por Botwell. La reina sabe que en la corte se la considera enamorada de Riccio. Riccio entra. Mary informa de un peligro mortal que lo amenaza y le dice adiós con frialdad y le señala el barco que lo llevará a Roma. En su desesperación, Riccio intenta rogarle a la reina que cancele la decisión de irse. La reina es inflexible.
Heinrich, Morton y Lindsay se enteraron de la inminente partida de Riccio y se apresuraron a matarlo o dejarlo navegar. Entonces aparece Douglas e informa que Riccio ya ha navegado. Douglas desesperado, anhela una sangrienta venganza, su honor de caballero está herido. De repente se encuentran con una página que le trae a la reina una nota de Riccio: él no se fue y estará con ella por la noche. Los conspiradores se llevan la nota.
María está ocupada bordando en su habitación. Riccio, que vino, le explica que no podía irse, porque tiene un duelo con Douglas por la mañana. Él admite que no necesita la vida sin su amor. Le pide a Mary que le dé una corona de rosas: plantará flores en el altar de Roma ... Henry, Douglas y Dindsay entran y matan a Riccio. La reina se desmaya. Douglas es golpeado por la vergüenza y el horror: se retira voluntariamente al exilio. Henry está preocupado si la reina lo odiará. Lindsay se lleva al rey y le susurra sobre la próxima cacería. Queen Botwell es invitada por Queen. Mary vuelve en sí, ve a Botvel y le confiesa su amor. La botella la obliga a admitir que quiere la muerte de Henry y le da su botella de veneno, diciendo que esta es una pastilla para dormir. Mary le pasa la "medicina" al rey, pero el veneno bebe el bufón. Sin embargo, nada puede detener la intriga asesina: Botwell explota la casa del rey Enrique. A lo lejos, se escuchan los crecientes gritos de la multitud. El botvel con la reina se está escondiendo.